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microrna如何检测

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最近在做microRNA的荧光素酶靶基因验证,靶基因的3’-UTR已经连接到了psicheck2的载体上,这个是公司做的,是鼠源的,而我用的mimics 也是鼠源的,转染自己的鼠源细胞效率很低,看很多文献上都是用HEK293细胞来转染的,但HEK293是人源的, 请问这个会影响实验结果吗?不同源的可以转染吗?? , microRNA一般是处理细胞多久以后检测的,我用菌感染细胞,检测几个指标。发现3h后,指标的mRNA变化最明显,但是蛋白水平的明显变化要到较晚的时间才出现。所以我检测microRNA的表达谱变化,是应该在mRNA变化最大的送测序么?但是感觉其他的文献细胞都是12h左右检测的,所...

cdna能够检测microrna吗: 根据你的反转录引物而定。
①如果是普遍反转录引物,则不需要,也就是反转录用一种引物将RNA全部反转成cDNA
然后定量的时候再使用miRNA和对应的普通基因各自的定量引物。
②若使用的是特异性反转录引物
则需要分开反转录,前面的buffer、酶等能混合,最后要分开,加入各自对应的反转录引物。
无论是普遍反转录还是特异性反转录,均可进行后续的定量。貌似特异性引物更精确。

转录组测序能检测microrna吗: 有可能,但是很难测到,因为转录组测序的实验过程值保留mRNA,去除了核糖体RNA,小RNA可能实验过程中会降解掉

qpcr怎么来检测microrna: 提RNA你会吧。。。 反转录你会吧。。。如果只是检测一般的mRNA的表达量 就用poly T反转录就可以了 如果是特殊的必须去另外合成特异引物 如果你想得到确切的浓度值 那必须在做RT的时候检测一个标准品 就是这里面东西的浓度你是确切知道的 然后做一条标准品曲线 然后拿你要检测的那个得到的值带到那个曲线里面就算出浓度了 大部分时候都是检测相对含量 就是这个mRNA在不同东西里面的比较 那就不用做标准品曲线 直接把得到的几个值比较下关系就可以了 大部分检测用的内参都是GAPDH 其他还有U6 U7可选

请问如何设计引物检测microRNA 前体呢: 宜的话,可以设计颈环引物反转录,染料法或者探针法检测。
如果用加尾法反转录,试剂盒就比较贵了。加尾一般染料法检测的多,很少见到探针法检测的

microRNA 荧光素酶检测实验: 你可以尝试多种转染试剂,现在小rna很火,各公司都有针对小rna的转染试剂,说不定就能试到一种特别适合你细胞的试剂,很多会提供试用装,需要申请。退一步讲人鼠很接近,如果仅验证是否为靶关注点在于序列特异性,应该也有很强说服力

microrna和mran提取检测的区别: MicroRNA (miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子,它们在动植物中参与转录后基因表达调控。
Messenger RNA (mRNA)——信使核糖核酸,信使RNA是由DNA的一条链作为模板[1] 转录而来的、携带遗传信息的能指导蛋白质合成的一类单链核糖核酸。

microRNA一般是处理细胞多久以后检测的,我用菌感染细胞,检测几个指标。: 不同的miRNA的所引起的最大抑制效果的峰值的时间是不一样的,在你说的这种情况下,我觉得3h是完全可以的。

请教一个问题 一般的RNA-seq能不能检测到miRNA了?? 检测miRNA要专门的small RNA seq???: 不能,miRNA成熟体太短了,在20~24nt左右波动,首先建库前可能就没有将Total RNA中的miRNA保留下来,更不可能去测了,所以通常所说的RNA-Seq就是测一下mRNA而已.
要检测出miRNA,在前期样品提取、样品建库过程上有所改变.

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