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pcr多久出结果

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本人用BIO-rad CFX manager2.1进行了定量PCR,得到结果后如何进行不同组间的显著性分析,是用上述软件就可以?还是需要导出数据用SPSS分析。知道的大侠帮忙回答一下啊。如果用SPSS具体怎么弄呢? 谢谢啊 谢谢啊 , 在PCR中目的基因能够扩增出来但是同时也会出现更亮的非特异性条带,片段小但是很亮,呈团状,两边都P出来了 中间是marker,两边目的片段有很强亮带
求问可能导致的原因和可能解决的方法 ...

pcr扩增多结果?: 普通PCR循环过多,增加变异率吧,克隆出来的序列出现突变的机率比较大,
如果混合样品的PCR要做高通量测序的,PCR循环过多得到的结果可能与原模板DNA的比例差别比较大,不能真实反应原始的比例关系

菌落pcr会出现假阳性结果吗: 高手们好。最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带;当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以菌落为模板进行PCR检测,再重新以菌液为模板进行PCR检测,因为菌落或者菌液PCR假阳性的几率还是比较高的。但如果还是出现以上结果,推测很可能是平板上残留的连接液中的未连接上载体的目的条带引起的,此时建议再提质粒做PCR检测和酶切检测来彻底证明你的目的片段是否真正与载体连接成功。 个人的见解希望对你有所帮助,也期望高手们批评指正!我觉得菌落PCR效果很好,虽然有假阳性的可能,但是只要是做出来,有目的条带一般是对的,你为什么还要用菌液做PCR?你还不如摇菌后提取质粒然后用质粒PCR或者酶切。既然你说到这个问题了,我觉得很有可能是你的质粒被稀释了,因为在菌落中的浓度比较大。另外也有可能是你根本就没有挑到正确的菌落来摇菌,所以就没有质粒,怎么能做出来。我觉得你做菌液的PCR和菌液的PCR必须是从单一的一个菌落挑出来的,如果不是,那肯定只有一个是正确的,我做过,只要是同一菌落不会有差错。你再试试看,祝你成功!谢谢各位高手的及时的回答。现在我都是挑单个菌落后摇菌,然后提取质粒,然后以质粒为模板做PCR,阳性的质粒再酶切进行鉴定,效果还可以。再次谢谢大家!!!第二次看到这种观点,不确定对不对,借道跟大家讨论一下,不知道lcc有没有文献支持一下这种观点?如果这种观点正确,那我以前很多关于T载体的看法就错了,所以很感兴趣。我一直以为外面的DNA片段会被大肠杆菌分泌出来的核酸酶降解。 lcc_0 wrote:推测很可能是平板上残留的连接液中的未连接上载体的目的条带引起的说来也很奇怪,以前我就是挑菌后加到LB液后摇菌,然后以菌液为模板进行PCR,再以阳性管提取质粒进行酶切鉴定,排除阴性管,这样可以少提一些质粒。最近菌液PCR总是阴性,所以就直接提质粒进行鉴定了。其中原因真的不知道是什么?我也遇到过,也许是涂抹的转化产物导致的加阳性(菌落PCR)。各位大大,我倒是碰到过菌液PCR是阴性,但是有质粒的情况,酶切也正确。一般我以为质粒抽屉和酶切鉴定是最保险的。PCR假阳性。假阴性的概率都很高。菌液的问题在于盐!盐会干扰PCR。 如果用菌液的话,可以用水洗涤离心几次,然后重悬于水,就可以了。 题外话:最近菌落PCR,阴性和阳性对照经常不扩增,而样品扩增,郁闷啊。

PCR求助,做不出来找不到原因: 是以霉菌基因组为模板做PCR的。共设计了四对引物,PCR三个基因。(其中有一对引物是PCR基因加上它上下游的)。发现都没有目的带。
1,模板质量应该没问题,跑过电泳,电泳大小在12K左右;OD600:OD800=1.81
2,引物设计,用Primer Premier设计的,有三组引物得分很高,与模板配对的引物长度为17~~20bp
3,PCR酶,DNTP,buffer没问题。用其他模板引物做过阳性对照,所以PCR得不到目的片段肯定是模板或引物的问题。

你好,谁帮我看下这荧光定量pcr检测出来的乙肝病毒结果是 恶化了还是只携带???急: 荧光定量pcr检测出来的乙肝病毒结果是2.02乘以10的4次方,20200,;就这一次的结果,没有比较不会知道病毒量是增加了还是减少了,自己可以对照上次的结果看看;要确诊是不是乙肝病毒携带者,需要做肝穿才可以的。如果还有问题,可以继续追问,当然也可以重新提问,希望我的回答能帮到你。

定量PCR以后数据如何进行显著性分析:

这个要看你用的是什么软件,我一般喜欢导出数据,计算表达量,然后用SPSS分析做方差分析,

如果需要设计定量PCR引物,可以参考网页链接

a-地贫基因点突变,pcr-rdb 结果未检出下述3种a-地中海贫血基因点突变,是代表什么: 未检出就是没有发现点突变α地贫。 缺失型3.7/4.2/SEA的结果呢? β地贫基因检查的结果呢?

pcr出现非特异性条带是为什么?: 通常如果出现非特异会首先尝试以下方法:
降低引物和聚合酶的用量,提高退火温度,或者是采用梯度PCR法,测试能够获得最佳结果的温度退火。
如果还是不行,就试试touchdown方法,退火温度从高到低,每隔一个反应温度下降1C或者怎么样的,这样可以便于扩增出特异性更好的条带。
当然,如果模板可以纯化一下,或者重新制备,也可以避免有非特异物质或者是降解的片段干扰。
总体来说,先优化。实在不行需要重新设计引物,并且将引物序列在NCBI里面和你的样品的基因组做一下比对,看看什么位置有可能造成非特异结合。

如何分析real-time PCR结果: 学习做Realtime PCR, 实验结果是出来了,得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间,熔
融曲线基本上也是单峰,但不太会处理这个结果,对着数据发愁.不同的处理方法得到不
同的结果.做的是相对定量,SYBR Green, 选用2^(-△ △ Ct)法
内参基因:对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
目的基因:对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
数据处理的时候,是先分别取内参、目的基因的三次平行实验的均值再拿相应均值相减得到
还有对于内参基因的数据,如果所得Ct 值差值在1 以内,是否可以将所有的内参取平均,
另外对于这个REAL-TIME PCR 的结果除了用EXCEL 处理之外有没有其他比较可信方便的
内参基因: 18s for control, 18s for treatment sample
目的基因: control sample, treatment sample
复孔取平均值△ Ct for control sample = Ct of comtrol sample - Ct 18s for control
△ Ct for treatment sample = Ct of treatment sample - Ct 18s for treatment sample
△ △ Ct = △ Ct for treatment sample - △ Ct for control sample2^(-△ △ Ct)2^(-△ △ Ct) =1 means miRNA expression no change2^(-△ △ Ct) 1 means expression increase after treatment

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